产品说明书：
PfAgo核酸内切酶（RADAR 用微球）
产品信息
产品名称：PfAgo Endonuclease（RADAR用微球） 规格：50T/100T
产品概述
冻干酶产品组分
组分 | 体积 | 数量 |
PfAgo Endonuclease（RADAR 用微球） | 50T | 1支 |
PfAgo Endonuclease Reaction Buffer（10x） | 50T | 1支 |
热稳定
95℃ 1小时，酶活性不损失。
运输与保存方法
2-8℃及以下运输及保存，长期保存建议放 4℃。
效期
-20℃及以下 24 个月。
单位定义
在 25 μL 反应体积中，95 ℃条件下反应 15 min，每分钟催化 0.1 nmol Target DNA 所需的 PfAgo 的蛋白量，定义为 1 个酶活力单位(U)。
质量控制
RNase 残留检测：2 μg 本酶和 1 µg 293 Cell RNA 在 37℃下孵育 30 min，经琼脂糖凝胶电泳，RNA 的电泳谱带不发生变化。 核酸内切酶残留检测：2 μg 本酶与 0.3 µg pBR322 DNA 在 37℃下孵育 4 h，经琼脂糖凝胶电泳，质粒的电泳谱带不发生变化。 核酸外切酶残留检测：2 μg 本酶与 50 pmol 单链 DNA 底物和双链 DNA 底物在 37℃下孵育 16 h，经变性 PAGE 电泳，DNA 的电泳谱带不发生变化。 大肠杆菌 DNA 残留检测：0.5 μg 本酶中残留的核酸经 E.coli gDNA 特异性的 TaqMan qPCR 检测，E.coli 基因组残留低于 10 拷贝。
实验流程
体外切割单链 DNA 操作方法：
1. 按顺序配置反应体系
试剂 | 体积 | 终浓度 |
10μM target | 10 μL | 4μM |
100μM guide | 2 μL | 8μM |
40mM Mn2+ | 1 μL | 1.6mM |
Reaction Buffer(10×) | 2.5 μL | — |
PfAgo（RADAR 用微球） | 1-2 粒 | — |
Nuclease-free H2O | up to 25 μL | — |
▲为了保证最高的切割效率，PfAgo Endonuclease 和 target 与 guide 的摩尔比例至少为 1：5：10 或者更高。
▲一般使用 25 μL 体系，但也可以等比例放大。
▲实验前请根据使用说明用无核酸酶水将 target 与 guide 稀释到相应浓度。
▲请使用无核酸酶水的耗材与试剂。
2. 95℃孵育 30 min。
3. 反应产物可直接进行核酸胶电泳分析。
▲ 如果不立即电泳，可以加入EDTA 终止反应。
结果图示
自备材料
试剂：Nuclease-free H2O
guide DNA
ss DNA
仪器：PCR仪器、金属浴或水浴锅
RNase free EP管
如需购买请联系：18621272896
